Ген АФП: регуляторный район: энхансеры
В регуляторном районе гена АФП крыс и мышей выявлены три независимых энхансерных элемента размером 200-300 п.н. ( EI , EII , EIII ) ( рис. 1 ) [ Godbout R. et al, 1988 , Wen P. et al, 1991 , Mathew J.K. et al, 1994 , Groupp E.R. et al, 1994 ].
Все эти элементы являются типичными энхансерами и способны усиливать экспрессию как с промотора АФП , так и с гетерологичных промоторов [ Mathew J.K. et al, 1994 ]. Как и промотор АФП, энхансеры тканеспецифичны и неактивны в негепатоцитарных клетках [ Mathew J.K. et al, 1994 ]. Каждый энхансер может активировать промоторы и СА , и АФП.
Вероятно, на некоторых стадиях развития и в некоторых линиях гепатом , в которых неактивен собственный энхансер СА, межгенные энхансеры независимо контролируют экспрессию обоих генов, причем соответствующие промоторы, благодаря взаимодействию с различными участками энхансеров, не конкурируют между собой [ Jin J.R. et al, 1995 ].
Все три энхансера крысиного гена АФП в гепатомных клеточных линиях оказывают аддитивное действие на промотор, наивысший уровень экспрессии достигается при наличии всех трех энхансеров [ Wen P. et al, 1991 ].
Однако ни промотор, ни энхансеры гена АФП не достаточны для подавления экспрессии этого гена после рождения [ Wen P. et al, 1991 , Camper S.A. et al, 1989 ].
Энхансеры мышиного гена АФП in vitro не различаются по активности и не вызывают аддитивного эффекта [ Godbout R. et al, 1988 , Millonig J.H. et al, 1995 ]. Однако в работах на трансгенных мышах показано, что in vivo каждый из энхансеров характеризуется различной активностью в любой из тех тканей ( желточный мешок , эмбриональные печень и кишечник ), где в норме экспрессируется АФП как с собственным, так и с гетерологичным промотором [ Hammer R.E. et al, 1987 , Ramesh T.M. et al, 1995 ]. Мышиный EIII активен также в клетках мозга [ Ramesh T.M. et al, 1995 ].
Все три энхансера потенциально активны в клетках взрослой печени мыши. EI и EII наиболее активны в гепатоцитах , окружающих центральную вену; EIII активен только в слое гепатоцитов, прилежащих к центральной вене [ Ramesh T.M. et al, 1995 ].
Эти данные подтверждают гипотезу о том, что одним из факторов, влияющим на экспрессию гена АФП во взрослой печени, является положение гепатоцита в печеночной дольке [ Abelev G.I., 1978 ]. Отсутствие активности EIII в большинстве взрослых гепатоцитов связано, по-видимому, с существованием негативных факторов, связывающихся с этим районом [ Ramesh T.M. et al, 1995 ].
Подробнее результаты, полученные при изучении регуляторных элементов гена АФП на трансгенных мышах, обсуждены в обзоре [ Spear B.T., 1999 ].
В энхансере EIII выявлены множественные сайты связывания регуляторных белков, в том числе гепатоцитарных ядерных факторов HNF3 и C/EBP и ядерного рецептора COUP-TF [ Qiu Y. et al, 1996 ], необходимые для полноценной стимуляции промотора АФП [ Groupp E.R. et al, 1994 , Millonig J.H. et al, 1995 , Thomassin H. et al, 1996 ].
В регуляторном районе гена АФП человека обнаружены два энхансерных элемента : -4,0/-3,7 и -3,7/-3,3 т.п.н. В проксимальном энхансере расположен сайт связывания HNF1 [ Nakabayashi H. et al, 1991 ].
