Иммунодефициты первичные: исследование клеточного иммунитета
Исследование поверхностных антигенов Т-лимфоцитов . Определение поверхностных антигенов Т-лимфоцитов с помощью проточной цитофлюориметрии позволяет изучить их созревание, дифференцировку и активацию ( табл. 18.8 ).
Стимуляция Т-лимфоцитов in vitro. Нарушения созревания и дифференцировки Т-лимфоцитов при иммунодефицитах с недостаточностью клеточного иммунитета происходят на разных уровнях. Так, при тяжелом комбинированном иммунодефиците нарушается созревание Т-лимфоцитов в тимусе, что проявляется отсутствием на поверхности Т-лимфоцитов антигена CD2 . При этом заболевании также возможны отсутствие СD3 , CD4 и неспособность Т-лимфоцитов синтезировать цитокины . При синдроме обнаженных лимфоцитов на мембране активированных Т-лимфоцитов отсутствуют антигены HLA класса II . При синдроме Вискотта-Олдрича снижена экспрессия антигена CD43 , участвующего в активации Т-лимфоцитов.
Тяжелые иммунодефициты с недостаточностью клеточного иммунитета сопровождаются выраженным нарушением функции Т-лимфоцитов , хотя абсолютное и относительное число этих клеток может быть нормальным.
Для стимуляции Т-лимфоцитов in vitro используют следующие вещества:
- Митогены - фитогемагглютинин , конканавалин A и др. - вызывают неспецифическую (не обусловленную связыванием с антигенраспознающими рецепторами) активацию Т-лимфоцитов.
- Растворимые антигены - антигены Candida albicans , столбнячный анатоксин - связываясь с антигенраспознающими рецепторами Т-лимфоцитов памяти, вызывают специфическую активацию этих клеток.
- Аллогенные клетки (в смешанной культуре лимфоцитов) активируют Т-лимфоциты, поскольку несут на своей поверхности антигены HLA класса II.
- Антитела к поверхностным антигенам Т-лимфоцитов, участвующим в их активации, - CD2 , CD3 , CD43 .
- Химические вещества, например форболмиристатацетат (активирует протеинкиназу С) и иономицин (повышает содержание внутриклеточного кальция).
Активацию Т-лимфоцитов обычно оценивают по следующим показателям:
- Пролиферация.
- Выработка цитокинов - интерлейкина-2 , интерлейкина-4 , интерлейкина-5 , интерферона гамма и фактора некроза опухолей .
- Экспрессия маркеров активации - CD25 и антигенов HLA класса II .
- Цитотоксичность.
Под действием митогенов, антигенов и аллогенных клеток покоящиеся Т-лимфоциты активируются, превращаются в бластные клетки и начинают делиться.
Таким образом, активацию лимфоцитов оценивают по включению 3Н- или 14С-тимидина в ДНК. Реакция лимфоцитов на стимулятор меняется в зависимости от дозы и продолжительности инкубации, поэтому перед проведением исследования необходимо построить нормальные кривые зависимости уровня включения изотопа от дозы стимулятора и времени инкубации лимфоцитов. Уровень радиоактивности клеток определяют с помощью сцинтилляциоиного счетчика и выражают в количестве импульсов в минуту. Результат оценивают по уровню радиоактивности нестимулированных (спонтанная пролиферация) и стимулированных лимфоцитов, а также по индексу стимуляции (отношение уровня радиоактивности стимулированных лимфоцитов к уровню радиоактивности нестимулированных лимфоцитов). Кроме того, можно вычислить отношение уровней радиоактивности стимулированных лимфоцитов больного и здорового человека. Спонтанная пролиферация лимфоцитов бывает повышена у больных, перенесших многократные переливания крови , больных аллергическими и аутоиммунными заболеваниями , при бактериальных и вирусных инфекциях , а также у новорожденных .
Смешанную культуру лимфоцитов применяют для оценки способности Т-лимфоцитов распознавать антигены HLA аллогенных В-лимфоцитов и моноцитов. Стимулирующие клетки (аллогенные В-лимфоциты) инактивируют облучением или митомицином. Реакция лимфоцитов больного оценивается по включению в ДНК меченого тимидина.
Для оценки клеточного иммунитета иногда используют иммунизацию динитрохлорбензолом . Его вводят внутрикожно и только с диагностической целью. Однако поскольку динитрохлорбензол оказывает сильное раздражающее действие и является канцерогеном, это исследование проводят редко.
Биохимические исследования. При подозрении на комбинированную недостаточность гуморального и клеточного иммунитета определяют активность аденозиндезаминазы и пуриннуклеозидфосфорилазы (участвуют в метаболизме нуклеозидов). При атаксии-телеангиэктазии почти всегда повышен уровень альфа-фетопротеина в сыворотке , что позволяет дифференцировать это заболевание с другими нервными болезнями . К редким метаболическим нарушениям , сопровождающимся недостаточностью клеточного иммунитета, относятся оротовая ацидурия и биотинозависимая недостаточность карбоксилаз (проявляется алопецией и неврологическими нарушениями ). При недостаточности транскобаламина II (участвует в транспорте витамина В12) поражаются быстрообновляющиеся ткани, поэтому для этого заболевания характерны недостаточность гуморального иммунитета , нарушения кроветворения ( анемия , тромбоцитопения ), понос и отставание в развитии .
Генетические исследования. У больных с тяжелой недостаточностью клеточного иммунитета возможен химеризм (существование клеток разных генотипов в одном организме). Он возникает при попадании материнских клеток крови в кровь плода , переливании компонентов крови и трансплантации костного мозга . Если в крови больного содержатся клетки человека противоположного пола, химеризм легко выявить, обнаружив клетки с женским и мужским кариотипами. В остальных случаях проводят типирование клеток крови больного по HLA. Это исследование также позволяет выявить отсутствие антигенов HLA класса II на активированных Т-лимфоцитах при синдроме обнаженных лимфоцитов .
Сканирующая электронная микроскопия выявляет Т-лимфоциты, на поверхности которых нет микроворсинок, что характерно для синдрома Вискотта-Олдрича .
Биопсия тимуса производится в ряде случаев для подтверждения диагноза тяжелого комбинированного иммунодефицита . При недостаточности клеточного иммунитета в тимусе определяются скопления ретикулоэпителиальных клеток, отсутствие телец Гассаля и четкой границы между корковым и мозговым веществом, резкое снижение числа тимоцитов. Биопсию тимуса проводят хирурги, владеющие техникой этой операции.
Биопсия лимфоузлов. При недостаточности клеточного иммунитета в биоптате лимфоузла выявляется опустошение паракортикальной зоны. Из-за риска раневой инфекции и осложнений анестезии биопсию лимфоузлов проводят только в том случае, когда другие лабораторные исследования не позволяют подтвердить диагноз.
