Пропионовокислое брожение: общие сведения
В пропионовокислом брожении мы имеем дело с карбоксилированием пирувата , приводящим к возникновению нового акцептора водорода - ЩУК (см. " Гетеротрофная ассимиляция углекислоты "). Восстановление пировиноградной кислоты в пропионовую у пропионовокислых бактерий протекает следующим образом ( рис. 54 ). Пировиноградная кислота карбоксилируется в реакции, катализируемой биотинзависимым ферментом, у которого биотин выполняет функцию переносчика СО2. Донором СО2-группы служит метилмалонил-КоA . В результате реакции транс-карбоксилирования образуются ЩУК и пропионил-КоA ( рис. 54 ).
Рассмотрим теперь дальнейшую судьбу каждого из двух продуктов реакции, а также вопрос о происхождении одного из субстратов реакции - метилмалонил-КоА. (Основным источником пировиноградной кислоты служит процесс гликолитического расщепления гексоз или окислительные превращения, если в качестве субстрата брожения используют, например, диоксиацетон или глицерин).
ЩУК в результате трех ферментативных этапов (аналогичных реакциям 6, 7, 8 цикла трикарбоновых кислот , см. рис. 92 ) превращается в янтарную кислоту :
СООН-СН2-СО-СООН + НАД*Н2 переходит обратимо при участии малатдегидрогеназы в
СООН-СН2-СНОН-СООН + НАД+;
СООН-СН2-СНОН-СООН переходит обратимо при участии фумаразы в
СООН-СН=СН-СООН + Н2О;
СООН-СН=СН-СООН + ФАД*Н2 переходит обратимо при участии фумаратредуктазы в
СООН-СН2-СН2-СООН + ФАД+, где
СООН-СН2-СО-СООН - ЩУК,
СООН-СН2-СНОН-СООН - яблочная кислота,
СООН-СН=СН-СООН - фумаровая кислота и
СООН-СН2-СН2-СООН - янтарная кислота.
Следующая реакция заключается в переносе КоA-группы с пропионил- КоA на янтарную кислоту (сукцинат), в результате чего образуются сукцинил-КоА и пропионовая кислота :
СООН-СН2-СН2-СООН + СН3-СН2-CO~S-КоA переходит обратимо при участии КоA-трансферазы в
СООН-СН2-СН2-CO~S-КоА + СН3-СН2-СООН, где
СН3-СН2-CO~S-КоA - пропионил-КоA,
СООН-СН2-СН2-CO~S-КоA - сукцинил-КоA,
СН3-СН2-СООН - пропионовая кислота.
Образовавшаяся пропионовая кислота выводится из процесса и накапливается вне клетки. Сукцинил-КоA превращается в метилмалонил-КоA:
СООН-СН2-СН2-CO~S-КоA переходит обратимо при участии метилмалонил-КоA-мутазы в метилмалонил-КоA .
В состав кофермента метилмалонил-КоA-мутазы входит витамин В12. Перегруппировки типа, указанного в приведенном выше уравнении, характерны для реакций, катализируемых ферментами, содержащими витамин В12. В описанной выше реакции происходящие перемещения атомов в молекуле сводятся к двум типам: изменению углерод-углеродных связей и перераспределению водорода между углеродными атомами ( рис. 55 ). Реакция, катализируемая мутазой, - ключевая в пропионовокислом брожении, так как в ней подготавливается субстрат, являющийся предшественником пропионовой кислоты.
Из схемы, представленной на рис. 54 , можно видеть, что образование пропионовой кислоты из пировиноградной - результат взаимосвязанного функционирования двух циклов: цикла переноса одноуглеродного фрагмента и цикла переноса кофермента A.
Кофермент A, принимающий активное участие в пропионовокислом брожении, относится к группе мононуклеотидов. Он содержит аденин, D-рибозу, пирофосфатную группу и пептидоподобное соединение, в состав которого входит пантотеновая кислота - еще один витамин группы В. Функция кофермента A заключается в переносе ацильных групп (RCO-). Ацильная форма КоA представляет собой тиоэфир . Тиоэфирная связь, образующаяся между карбоксильной группой кислоты и тиоловой группой КоА, является высокоэнергетической.
Итак, разобранный выше поток реакций приводит к синтезу пропионовой кислоты . Однако пропионовокислое брожение - более сложный процесс, поскольку наряду с пропионовой кислотой в качестве продуктов брожения образуются уксусная , янтарная кислоты и СО2 . В схеме, изображенной на рис. 54 , янтарная кислота образуется как промежуточное соединение на пути, ведущем к синтезу пропионата; но она может накапливаться в среде и как конечный продукт. К образованию сукцината, количество которого зависит от содержания СО2 в среде, ведет последовательность реакций, начинающаяся с карбоксилирования ФЕП ( рис. 56 ), в которой остаток фосфорной кислоты ФЕП переносится на неорганический фосфат, что приводит к образованию пирофосфата :
ФЕП + СО2 + Фн переходит обратимо в ЩУК + пирофосфат.
Дальнейшие превращения ЩУК до янтарной кислоты аналогичны реакциям 2-4, изображенным на рис. 54 .
Многие пропионовые бактерии сбраживают глюкозу так, что на каждую молекулу пирувата, окисленную до уксусной кислоты и СО2, приходятся 2 молекулы пирувата, восстановленные до пропионовой кислоты. Путь превращения пирувата, приводящий к образованию уксусной кислоты и СО2, представлен на рис. 56 . На этом пути имеют место окислительно- восстановительные реакции, идущие с вовлечением новых молекул НАД+. Пируват подвергается окислительному декарбоксилированию с участием кофермента A:
СН3-СО-СООН + НАД+ + КоA-SH переходит при участии пируватдегидрогеназы в
СН3-СО~S-КоA + СО2 + НАД*Н2, где
СН3-СО~S-КоA - ацетил-КоA.
Процесс катализируется пируватдегидрогеназным комплексом и практически необратим. В результате образуется ацетил-КоА, содержащий высокоэнергетическую тиоэфирную связь, ацетильная группа с которого переносится на неорганический фосфат, что приводит к образованию ацетилфосфата и регенерированию кофермента А:
СН3-СО~S-КоA + Фн переходит обратимо в
СН3СО~Ф + КоA-SH.
В этой реакции энергия, заключенная в тиоэфирной связи, реализуется в виде высокоэнергетической фосфатной связи ацетилфосфата.
И наконец, ацетилфосфат донирует фосфатную группу на АДФ с образованием АТФ и уксусной кислоты :
СН3-СО-О~Ф + АДФ переходит обратимо при участии ацетаткиназы в
АТФ + СН3-СООН, где СН3-СООН - ацетат.
Итак, на участке от пирувата до ацетата образуется 1 молекула НАД*Н2 и 1 молекула АТФ. Энергетическое значение для пропионовых бактерий этого участка метаболического пути очевидно и не требует обсуждения.
Кроме основных продуктов в разных количествах в культуральной жидкости пропионовых бактерий обнаружены молочная, муравьиная, изовалериановая кислоты, этиловый и пропиловый спирты, уксусный и пропионовый альдегиды, ацетоин, диацетил. Состав конечных продуктов брожения зависит от культуры бактерий, состава среды и условий культивирования. Это касается как видов накапливаемых продуктов, так и количественных соотношений между ними.
