Ко-конверсия
Итак, гетеродуплекс - это промежуточная структура в реализации кроссоверного обмена . Каковы размеры гетеродуплекса? Их можно оценить по расстоянию между гетероаллелями , на котором происходит совместная конверсия . Ко-конверсия является результатом включения двух или большего числа гетерозиготных сайтов в единый гетеро- дуплекс.
Оценивая частоту совместной конверсии гетероаллелей, удалось показать,что длина гетеродуплекса у дрожжей Sachoromyces cerevisiae составляет примерно 1.5 тысячи пар оснований ( Rhana et al.,1989 ). Сходная длина конверсионного тракта - от 0.7 до 2-х тысяч пар оснований показана для дрозофилы. Длины конверсионных трактов в обменных и необменных тетрадах не различаются.
Уже в начале изучения конверсии было показано, что разные аллели одного и того же локуса могут существенно различаться по частоте конверсии. Долгое время причины таких различий оставались неизвестными. В некоторых работах было показано, что уровень конверсии зависит от положения данного аллеля в локусе, при этом в пределах локуса часто наблюдается градиент конверсионных частот.
Детально была изучена конверсия в локусе ARG-4 у Sacharomices cerevisiae ( Fogel et al.,1978 ).
Для изучения конверсии в локусе ARG были использованы синтезированные in vitro участки ДНК. Было сконструировано 7 аллелей, нарушающих разные сайты рестрикции , и введено в дрожжевой геном в локус ARG. Линии дрожжей, несущие разные "arg"-аллели, были скрещены между собой, и у гибридов оценивали частоту конверсии. Оказалось, что имеется градиент частот конверсионных событий: аллели, расположенные в начале гена arg, конвертируют значительно чаще, чем аллели, локализованные в конце локуса. Этот градиент сохраняется даже в том случае, если все использованные аллели имеют одинаковую физическую природу.Для идентификации последовательностей ДНК, ответственных за полярный эффект конверсии в локусе ARG, был использован делеционный анализ.
Если предположить, что имеется единственный сайт, ответственный за полярность конверсии, то тогда можно ожидать три типа делеционных эффектов в зависимости от их локализации. Во-первых - отсутствие эффекта, если делеция расположена за пределами активного участка сайта инициации конверсии. Во-вторых - делеция сайта инициа- ции конверсии должна приводить к уменьшению частоты конверсии всех гетероаллелей в локусе. И в-третьих - делеции, сближающие аллели с сайтом инициации конверсии, должны приводить к возрастанию частоты конверсионных событий в сближенных аллелях и не изменять частоту конверсии в сайтах, расположенных вблизи сайта инициации.
Всего было изучено одинадцать делеций. Были обнаружены все предсказанные эффекты. Оказалось, что что центр инициации конверсии находится в 5'-конце локуса ARG. Если обе гомологичные хромосомы имеют делецию сайта инициации конверсии,то это приводит к уменьшению частоты конверсии всех аллелей локуса ARG4.
