NRE
Негативный регуляторный элемент, названный NRE , занимает не более 26 н.п. ( Hay N., Takimoto M. and Bishop J.M., 1989 ) и находится в районе -318/-343 н.п. (См. C-myc: Транскрипции негативная регуляция ).
Он содержит АТ-богатую "коровую" последовательность, окруженную 8-нуклеотидными инвертированными повторами ( Hay N., Bishop J.M. and Levens D., 1987 ). Нуклеотидная последовательность этого участка сходна с нуклеотидными последовательностями негативного регулятора адипоцит- специфического гена aP2, так называемого FSE2 , и регуляторного участка металлотионеина IIa-hMT4-A-AP1 ( Hay N., Takimoto M. and Bishop J.M., 1989 ). Обе эти последовательности связываются с транскрипционным фактором AP1 .
NRE образует с белками ядерного экстракта из клеток HeLa три комплекса, a, b, и c ( Hay N., Takimoto M. and Bishop J.M., 1989 ). При торможении в геле анализ взаимной конкуренции между олигонуклеотидами FSE2 и hMT2A-AP1 показал, что FSE2 и hMT2A-AP1 конкурируют с NRE за связывание одного и того же фактора из ядерного лизата клеток HeLa, причем комплексы, образующиеся с меченным FSE2, соответствуют по размеру комплексам b и c. Как было показано в экспериментах с анти-Fos антителами, один из этих комплексов (b) содержит продукт онкогена fos (или антигенно очень близкий белок) и продукт онкогена jun ( Hay N., Takimoto M. and Bishop J.M., 1989 ), так как предобработка лизатов анти-Fos антителами приводит к исчезновению связывания с NRE и FSE2. В параллельном Southern-Western блоттинге с анти-Fos антителами и меченным олигонуклеотидом NRE взаимодействует белок одного и того же молекулярного веса. Опыты по связыванию аффинно очищенного AP1 с меченным NRE доказали, что комплекс Jun/NRE комигрирует с полосой b ( Hay N., Takimoto M. and Bishop J.M., 1989 ).
Таким образом, один из специфических комплексов, образуемых NRE с экстрактом клеток HeLa, а именно соответствующий полосе b, содержит продукты онкогенов fos и jun. По-видимому, взаимодействие этих белков с NRE происходит кооперативно, т.к. транслированные в системе in vitro белки Fos и Jun по отдельности не связывались с NRE, в то время как их одновременная трансляция приводила к связыванию.
Кроме того, в гене c-myc существует еще один потенциальный участок связывания белка Fos ( рис.5 ). Далее см. C-myc: Взаимосвязь с генами fos и jun .
