Двухуровневая структура прионных агрегатов Sup35
Есть все основания полагать, что дрожжевые прионы состоят из амилоидных фибрилл . Так, полученные in vitro белки Sup35 , Ure2 и Rnq1 образуют фибриллы с универсальной структурой, которые обладают всеми свойствами амилоидных фибрилл ( Glover et al., 1997 ; King et al., 1997 ; Derkatch et al., 2004 ). Более того, такими фибриллами Sup35 и Ure2 можно трансформировать клетки [psi-] и [ure3] с получением [PSI+] и [URE3] , соответственно ( King and Diaz-Avalos, 2004 ; Tanaka et al., 2004 ; Brachmann et al., 2005 ). Был разработан простой подход, позволяющий отличать прионные частицы от огромного количества прочих клеточных комплексов. В отличие от этих комплексов, прионные полимеры Sup35 и Rnq1 нерастворимы в присутствии додецил сульфата натрия (SDS, Sodium Dodecyl Sulfate) при комнатной температуре ( Kryndushkin et al., 2003 ; Bagriantsev and Liebman, 2004 ). Что вероятнее всего является общим свойством всех амилоидов.
Обработка агрегатов Sup35 SDS уменьшала их размер примерно в 35 раз. Следовательно эти агрегаты содержат множество SDS-устойчивых частиц, т.е. прионных полимеров, которые представляют собой амилоидные фибриллы. Кроме того, такие агрегаты должны содержать значительную долю ассоциированных белков или комплексов, поскольку даже в состоянии [psi-] большая доля Sup35 обнаруживается в высокомолекулярных фракциях.
Разработан метод анализа размеров прионных полимеров, названный полуденатурирующим электрофорезом в агарозном геле (SDD-AGE; Semi- Denaturating Detergent Agarose Gel Electrophoresis). Этот метод выявил, что полимеры Sup35 в клетках [PSI+] состоят в среднем из 10-50 молекул, в зависимости от прионного варианта ( Kryndushkin et al., 2003 ).
Таким образом, дрожжевые прионные агрегаты представляют собой комплексы более высокого порядка, состоящие из относительно коротких амилодных полимеров и некоторых неприонных молекул.
