Использование прогестерона сыворотки крови для регуляции овуляции у сук
Традиционно вязка собак происходит на 9-й, 11-й и 12-й день после начала проэструса, причем 1-й день определяется по появлению серозно-геморрагических выделений из припухшей вульвы. Хотя в среднем овуляция у сук происходит на 12-й день после начала проэструса , у большинства здоровых сук самое раннее начало овуляции может произойти на 5-й день, и самое позднее - на 25-й день после начала проэструса. Поэтому суку могут посчитать бесплодной, .если вязка произошла на 9-й, 11-й или 13-й день, а беременность не наступила. Для точного определения времени овуляции у суки в эструсе можно использовать измерение сывороточной концентрации прогестерона, а следовательно, повысить эффективность мероприятий по разведению собак.
Когда у здоровой суки начинается фаза проэструса, у нее припухает вульва, из которой начинает выделяться различное количество серозно-геморрагического транссудата. Фолликулостимулирующий гормон (ФСГ) , выделяющийся гипофизом , способствует стимуляции различного количества фолликулов в яичниках . После созревания фолликулов выстилающие их гранулезные клетки начинают секретировать повышенное количество эстрадиола-17бета . Эстрадиол-17бета стимулирует постепенное ороговение влагалищных эпителиальных клеток. При прогрессировании проэструса эксфолиация неороговоевших влагалищных эпителиальных клеток (парабазальных и переходных) с нормальными ядрами сменяется эксфолиацией больших и угловатых ороговевших клеток (поверхностных и безъядерных сквамозных клеток ) с ядрами в стадии пикноза и растворения. Полиморфоядерные лейкоциты (ПМЛ) преобладают в образцах из влагалища, взятых в ранний проэструс, и отсутствуют в поздний проэструс. Кобелей привлекает текущая сука, однако большинство сук не показывают рецептивного поведения для размножения (поза для вязки, отведение хвоста в сторону, поднятие вульвы). Проэструс заканчивается на 9-й день с колебаниями от 0-го до 17-го дня у здоровых сук.
В конце проэструса и начале эструса сывороточная концентрация эстрадиола-17бета резко падает, что совпадает с выбросом лютеинизирующего гормона (ЛГ) . Сывороточная концентрация прогестерона становится выше 1 нг/мл в день выброса ЛГ или за 2 дня до овуляции, когда фолликулы претерпевают предовуляционную лютеинизацию. Это падение соотношения эстроген/прогестерон сопровождается началом рецептивного поведения у сук.
Эструс , или охота определяется по поведению суки. Она становится в позу для вязки. Вульва может стать мягче, но не уменьшается в размерах. Выделения из вульвы варьируют по количеству и по цвету от серозогеморрагических до желтых. Происходит эксфолиация влагалищных эпителиальных клеток, которые ороговели в течение эструса. Эструс определяется цитологически, когда 50% клеток превратятся в безъядерные сквамозные клетки. Во влагалищных мазках могут присутствовать бактерии, ПМЛ отсутствуют. Эструс продолжается в среднем 9 дней с колебанием у здоровых сук от О до 21 дня.
Выброс ЛГ начинается за 3 дня до начала эструса и заканчивается через 5 дней после начала эструса. Поскольку выброс ЛГ и последующая овуляция мало коррелируют с началом эструса, рецептивного поведения или цитологическими изменениями, то эти параметры не могут служить показателем времени овуляции у сук.
Вероятность зачатия намного выше, если суку повязать в период с 4-го дня до овуляции по 2-й день после овуляции, а максимальный помет можно получить при проведении вязки на 2-й день после овуляции. Суки могут забеременеть после одного осеменения на 2-3-й день после овуляции. У суки происходит овуляция первичного ооцита , который должен претерпеть 2 мейотических деления перед оплодотворением. Этот процесс созревания занимает 48-72 часа. Зрелая яйцеклетка остается жизнеспособной 2-3 дня. Нормальный сперматозоид может жить в половых путях суки после естественного оплодотворения в течение 5-6 дней.
Измерение сывороточной концентрации ЛГ можно использовать для предсказания дня овуляции в течение эстрального цикла. В коммерческих лабораториях выполняют радиоиммунный анализ (РИА) ЛГ, но он занимает слишком много времени, чтобы использовать его в клинической практике. Поскольку ЛГ является гликопротеиновым гормоном с уникальным для каждого вида животных строением, можно использовать анализ, специфичный для ЛГ собак. Для определения ЛГ собак широко применяется ферментный иммунносорбентный тест ( ELISA ). Преимуществом теста ELISA является простота его практического использования. Однако нет опубликованных данных о точности этого теста, к тому же краткость пиковых значений ЛГ требует постоянного тестирования крови, которое неудобно и дорого для владельцев собак.
Для предсказания дня овуляции также можно использовать сывороточную концентрацию прогестерона. В исследовании 49 сук измеряли сывороточную концентрацию прогестерона во время проэструса и эструса , успешного оплодотворения и беременности. Содержание прогестерона в сыворотке увеличивается при выбросе ЛГ, в этот день оно достигает 1,0-1,9 нг/мл (3,1-5,9 нмоль/л). На следующий день после выброса ЛГ или за 1 день до овуляции концентрация прогестерона достигает 2,0-3,9 нг/мл (6,2-12,1 нмоль/л). В день овуляции концентрация прогестерона равна 4,0-10,0 нг/мл (12,4-31,0 нмоль/л). После овуляции на месте каждого лопнувшего фолликула образуется желтое тело (ЖТ) , которое начинает продуцировать прогестерон, поэтому его концентрация растет быстро и непредсказуемо. Она остается высокой до родов, достигая своего максимума в середине диэструса - 15-90 нг/мл.
В коммерческих лабораториях проводят РИА для определения сывороточной концентрации прогестерона. Поскольку прогестерон является стероидным гормоном и его структура одинакова у всех видов животных, то для собак не нужен специальный анализ. РИА дают качественный результат. Так как сывороточная концентрация прогестерона предсказуемо растет во время выброса ЛГ и овуляции и затем продолжает оставаться высокой, не нужно ежедневных анализов крови. На практике осеменение сук свежей спермой проводят, когда концентрация вырастает в 2 раза за неделю. Нужно проконсультироваться в коммерческой лаборатории о взятии и транспортировке образцов, а затем ждать результатов анализа по факсу или телефону.
Для практического определения сывороточной концентрации прогестерона используют несколько наборов ELISA (Status-LH, Sybiotics, Malvern PA; PreMate, Camelot Farms, Colledge Sation, TX). Тесты ELISA дают количественный результат, изменения цвета являются показателем для различных значений. Сравнение РИА и ELISA показали плохую корреляцию между двумя методами, причем неточность ELISA составила от 9 до 47,1%. Наибольшая неточность приходится назначения от 1,5-3,0 нг/мл до 5,0-10,0 нг/мл (4,7-9,3 до 15,5-31,0 нмоль/л), то есть на ту концентрацию, которая важна для размножения собак. Набор ELISA более точен на верхнем пределе значений, больших 5,0-10,0 нг/мл (1,5-31,0 нмоль/л), здесь точность составляет 87,3-96,0%.
После эструса в эстральном цикле собак происходит диэструс. Вне зависимости от того, была ли оплодотворена сука или нет, еще в течение 2 месяцев диэструса у нее сохраняются желтые тела и производство прогестерона. Начало диэструса определяют цитологическими методами по резкому сокращению числа ороговевших клеток. Эти резкие изменения (на 50%) в количестве поверхностных и безъядерных сквамозных клеток и появление ПМЛ наблюдаются на 6-й день после овуляции. У 95% оплодотворенных сук беременность продолжается 61-65 дней после овуляции. Следовательно, определение начала диэструса и знание даты зачатия позволяют вычислить дату овуляции в данном цикле.
