Структура MAT и его транскрипты
Локус MATalfa был клонирован по восстановлению способности к копуляции у трансформантов matalfa. MATa , а также HMR и HML удалось отклонировать по гибридизации с проклонированным MATalfa ( Hicks et al., 1979 , Nasmyth, Tatchell, 1980 ). Благодаря этому проявилась возможность проанализировать структуру и исследовать экспрессию MAT.
У MATа , MATalfa , HMR и HML имеются области гомологии (w, x, z1, z2), обрамляющие участки Ya или Yalfa, по которым различается информация в a и alfa. Каждая аллель MAT образует два транскрипта. Транскрипты а1 и а2 можно выявить у клеток а и a/alfa, транскрипт alfa1 только в клетках alfa. Мутации mata1 и matalfa2 приводят к экспрессии MATalfa1 в диплоидах. Транскрипт alfa2 имеется как в alfa, так и в a/alfa клетках, но в последнем случае его количнство резко снижено ( Klar et al., 1981 ; Nasmyth et al., 1981 ). Таким образом, исследование транскриптов подтверждает кассетную модель ( Strathern et al., 1981 ).
Определена нуклеотидная последовательность MATa и HMLalfa, в которой показано наличие общей регуляторной области транскрипции. Для транскриптов alfa1 и alfa2 она лежит в Yalfa, а для а1 и а2 почти полностью в Ya ( Astell et al., 1981 , Tatchell et al., 1981 ).
Для подробного исследования регуляторной области MAT была получена серия делеций с точно локализованными концами в промоторе проклонированного MATalfa. Хромосомную копию MATalfa или MATa замещали мутантной. Если делеция влияла на экспрессию МAТ, трансформанты alfa приобретали фенотип Alf, если нет, то фенотип трансформантов alfa не менялся. У интегрантов исследовали транскрипцию МAТ. Таким образом выявили функцию различных участков регуляторной области. Были найдены ТAТA-боксы, необходимые для точности инициации транскрипции, и между ними сайт, делеция которого подавляет транскрипцию и alfa1 и alfa2. В MATalfa имеется также сайт "диплоидной регуляции", делеция которого приволит к экспрессии alfa1 и alfa2 у клеток a/alfa. В регуляторной области МAТа найдены ТAТA-боксы для обоих транскриптов и несколько инвертированных повторов. Сайт, аналогичный промотору MATalfa, отсутствует ( Siliciano, Tatchell, 1984 ).
Сайты "диплоидной регуляции" впоследствии были найдены во многих генах.
