Иммунодефициты первичные: исследование фагоцитов
Исследование фагоцитов показано при хронических бактериальных инфекциях и рецидивирующих бактериальных инфекциях , если исследование гуморального и клеточного иммунитета не выявило отклонений от нормы. Недостаточность фагоцитов может быть обусловлена нарушением миграции, хемотаксиса, адгезии фагоцитов, а также нарушением собственно фагоцитоза. Кроме того, недостаточность фагоцитов может быть обусловлена дефицитом опсонинов (антител и комплемента) и нарушением метаболизма фагоцитов.
Тест восстановления нитросинего тетраэолия применяется в диагностике хронической гранулематозной болезни . Суть метода заключается в следующем: к фагоцитам добавляют желтый краситель нитросиний тетразолий, в норме при его поглощении метаболическая активность фагоцитов возрастает, нитросиний цитразолий восстанавливается, продукты этой реакции окрашены в синий цвет. О нарушении метаболизма фагоцитов судят по снижению интенсивности синего окрашивания. При выявлении нарушений определяют уровень цитохрома b558 и других белков фагоцитов.
Хемилюминесценция также позволяет оценить функциональную активность фагоцитов. В норме при фагоцитозе появляется большое количество свободных радикалов кислорода, окисляющих субстрат, например компоненты клеточной стенки бактерий. Окисление сопровождается излучением видимого или ультрафиолетового света. По интенсивности изучения можно судить о функциональной активности фагоцитов.
Оценка фагоцитарной активности - наиболее информативный способ исследования опсонинов и функционального строения фагоцитов .
Техника проведения:
- Лейкоциты, выделенные из крови больного, отмывают от сыворотки, подсчитывают и помещают в среду, содержащую сыворотку здорового или больного ( источник опсонинов) и живые бактерии ( обычно Staphylococcus aureus или Escherichia ).
- Смесь инкубируют при 37 градусах по С, отбирая пробы через 0, 30, 60, 120 мин. после начала инкубации. Для определения числа жизнеспособных бактерий каждую пробу быстро охлаждают и делают посев.
- Через 2 ч после начала инкубации смесь центрифугируют. Лейкоциты и фагоцитированные бактерии оседают на дно, а нефагоцитированные бактерии остаются в надосадочной жидкости. В осадке и надосадочной жидкости определяют число жизнеспособных бактерий.
Оценка результатов. В норме в течение 2 ч фагоцитами поглощается около 95% бактерий. При хронической гранулематозной болезни число разрушенных бактерий не превышает 10%, а внутри лейкоцитов обнаруживаются жизнеспособные бактерии. Присутствие живых бактерий в лейкоцитах при инкубации с сывороткой здорового свидетельствует о нарушении переваривания бактерий в отсутствие снижения способности к захвату бактерий. Повышенное содержание жизнеспособных бактерий в надосадочной жидкости при инкубации с сывороткой больного свидетельствует о дефиците опсонинов .
Хемотаксис лейкоцитов. Нарушение хемотаксиса лейкоцитов может быть обусловлено дефектом фагоцитов, наличием ингибиторов хемотаксиса, дефицитом сывороточных или тканевых факторов хемотаксиса.
Метод кожного окна . С помощью скальпеля удаляют поверхностный слой с эпидермиса площадью 4 мм (при этом должно появиться небольшое количество крови). На поврежденный участок помещают покровное стекло. В течение суток каждые 0,5-2 ч покровное стекло меняют. Затем стекла окрашивают и исследуют под микроскопом находящиеся на них лейкоциты. В норме в течение первых 2 ч наблюдается приток нейтрофилов к месту повреждения. В течение последующих 12 ч нейтрофилы замещаются моноцитами.
Исследование хемотаксиса in vitro основано на стимуляции выделенных из крови фагоцитов факторами хемотаксиса. Способность фагоцитов к направленной миграции можно оценить, поместив их в камеру Бойдена или чашку Петри с агарозой.
Адгезия лейкоцитов. Нарушение адгезии лейкоцитов обусловлено снижением экспрессии или отсутствием на их поверхности молекул адгезии, например CD11/CD18 . Для определения молекул адгезии применяют проточную цитофлюориметрию. Отсутствие CD11/CD18 на нейтрофилах и моноцитах проявляется поздним отпадением пуповины , рецидивирующими бактериальными инфекциями , пародонтитом . Адгезию лейкоцитов можно также оценить по их способности прилипать к эндотелиальным клеткам. Однако это исследование проводилось лишь в некоторых лабораториях.
Диагностика асплении . Селезенка играет важную роль в защите от инфекции, так как содержит огромное количество макрофагов и плазматических клеток. У больных с аспленией часто наблюдается сепсис , в мазках крови выявлются деформированные эритроциты и тельца Говела-Джолли. Асплению выявляют с помощью сцинтиграфии и других методов исследования.
Другие исследования. Определение активности миелопероксидазы, глутатионпероксидазы проводят для выявления нарушений функций фагоцитов и в научных целях. При нейтропении показаны повторные определения числа лейкоцитов в крови, определения числа лейкоцитов в крови после введения кортикостероидов , адреналина и эндотоксина , определение антител к лейкоцитам, исследование костного мозга.
Исследование костного мозга проводят при стойкой лейкопении или лейкоцитозе , изменении морфологии лейкоцитов , выявлении бластных форм в крови .
