РНК-зависимая ДНК-полимераза (обратная транскриптаза, ревертаза)

Обратные транскриптазы способны осуществлять синтез ДНК на матрице РНК, полимеризуя четыре дезоксирибонуклеозидтрифосфата. Обратные транскриптазы, так же как и ДНК-полимеразы, функционируют только при наличии затравки.

Обратная транскриптаза вируса миелобластоза птиц помимо полимеризующей активности обладает 5'->3'- и 3'->5'- экзорибонуклеазными активностями и расщепляет РНК в ДНК-РНК- гибридах по процессивному механизму. Обратные транскриптазы применяются в синтезе двухцепочечных ДНК, комплементарных РНК (особенно мРНК), для последующего ее клонирования в плазмидных векторах при получении библиотек (клонотек) кДНК . Обратные транскриптазы, подобно ДНК-полимеразам, могут быть использованы для введения радиоактивной или флуоресцентной метки в ДНК-зонды в составе соответствующим образом меченных дезоксирибонуклеозидтрифосфатов.

Способность синтезировать ДНК на матрице РНК в определенных условиях была продемонстрирована для термостабильной ДНК- полимеразы Thermus thermophilus . Это позволяет использовать ее для прямого обнаружения специфических РНК в биологических образцах методом ПЦР . Современные модификации такого подхода дают возможность в одной реакционной смеси (и пробирке) синтезировать в реакции обратной транскрипции небольшое число копий амплифицируемого фрагмента ДНК на матрице РНК, которые сразу же используются тем же ферментом в качестве матрицы в обычной ПЦР (one tube PCR).

Ссылки:

Все ссылки