Ген TAT: Регуляторные зоны
Экспрессия этого гена происходит только в паренхимных клетках печени . В гене TAT имеются две регуляторные зоны, расположенные на расстоянии -5.5 и -2.5 т.п.н. относительно старта транскрипции ( рис. 5 ). При присоединении к гетерологичному промотору обе GRU обеспечивают регуляцию транскрипции репортерного гена глюкокортикоидами лишь в клетках высокодифференцированных гепатом FTO2B и H4II [ Grange T. et al., 1991 , Nitsch D. et al., 1993 ] или только в клетках печени трансгенных животных [ Sassi H. et al., 1995 ]. Помимо сайтов связывания ГР, эти зоны содержат множественные сайты связывания факторов HNF-3 и C/EBP , т.е. именно тех факторов, которыми обогащены паренхимные клетки печени.
Строгая специфичность экспрессии гена ТАТ в печени обеспечивается, по крайней мере, еще тремя регуляторными зонами: промоторной областью и двумя печень-специфическими энхансерами, расположенными на расстоянии -3.6 и -11 т.п.н. от старта транскрипции ( рис. 5 ). В промоторе выявлены сайты связывания факторов транскрипции HNF-1 и NF-1-liver , синтезируемых, в основном, в печени. Энхансер, расположенный в области -11 т.п.н., содержит сайт связывания преимущественно печень- специфического фактора HNF-3 , а также участки, взаимодействующие с пока неидентифицированными печень-специфичными факторами. Ведущими элементами энхансера, расположенного на расстоянии -3.6 т.п.н., оказались сайт связывания фактора HNF-4 и элемент CRE . Показано, что CRE является мишенью продукта локуса TSE1 , который, главным образом, обеспечивает затухание экспрессии гена ТАТ в клеточных гибридах гепатома-фибробласт.
Локус TSE1 кодирует регуляторную субъединицу RIальфа протеинкиназы А , продукция которой низка в гепатоцитах . В монохромосомных гибридах TSE1+, содержащих фрагмент хромосомы 17 мыши , несущий локус TSE1, уровень RIальфа высок, поэтому высвобождение каталитической субъединицы протеинкиназы А затрудняется. Соответственно, регуляторный белок CREB , который способен связываться с CRE энхансера в участке -3.6 т.п.н. только в фосфорилированном состоянии, остается немодифицированным, что приводит к 20-ти кратному снижению уровня экспрессии гена ТАТ в присутствии TSE1 локуса ( рис. 6а ) [ Boshart M. et al., 1993 ]. В данной ситуации прежний уровень экспрессии гена ТАТ может быть восстановлен обработкой клеток cАМР ( рис. 6б ).
Таким образом, на примере регуляторных зон гена ТАТ видно, что достижение печень-специфичной экспрессии этого гена зависит от двух условий: 1) обогащенности данной ткани набором нужных для экспрессии данного гена транскрипционных факторов, 2) обеднения данной ткани регуляторными белками, препятствующими экспрессии этого гена.
