Мутации в последовательности РНК и сплайсинг
Так же как и изучение реакций, специфических к последовательности нуклеотидов, анализ мутаций показывает, какие последовательности необходимы и могут играть важную роль в процессе сплайсинга.
Есть два типа мутаций в канонических последовательностях, влияющих на сплайсинг. Первый - это мутации в 5' и 3' сайтах сплайсинга , которые приводят к уменьшению количества зрелой РНК и часто активизируют близлежащие ложные сайты, что приводит к образованию ненормальной РНК. Включение в работу ложных сайтов с незначительным совпадением в последовательности с истинным демонстрирует значительную вариабельность в последовательности сайтов сплайсинга. Наличие единственного функционального сайта свидетельствует о существовании точного правила в распознавании канонической последовательности. Потеря работоспособности ложного сайта в присутствии истинного может говорить о значительно более высокой скорости реакции сплайсинга с участием истинного сайта над реакцией с ложным. Второй тип - мутации в интронах , приводящие к образованию нового сайта сплайсинга. Эти мутации приводят как и мутации первого типа к производству ненормальной РНК.
Наибольшая группа сплайсинговых мутантов была получена с помощью мутации in vitro и делались попытки получить их in vivo. Ранние исследования, использующие модифицированные интроны показывают, что большинство последовательностей внутри интронов несущественны для сплайсинга, что еще раз подчеркивает определяющее значение участков сплайсинга.
Интересно, что мутации либо в 5' сайте, либо в 3' сайте могут приводить к аккомуляции промежуточной РНК в форме лариата .
Мутации: номенклатураМутации доминантно-негативные
(gain-of-function)
