Внутригенное картирование
Внутригенная рекомбинация в мейозе происходит с частотой порядка 100, в митозе - около 100000-1000000 на клетку, поэтому возможность и разрешающая способность внутригенного картирования зависят от доступности селективных методов выявления рекомбинантов. Чаще используют митотическую рекомбинацию , так как митотические рекомбинанты проще селектировать, нежели мейотические.
Методы картирования можно разделить на две группы: количественные и качественные. Количественные методы основаны на учете частот рекомбинации и принципе линейности или аддитивности. При построении внутригенных карт, т.е. при рекомбинации на коротких участках встречается слишком много нарушений принципа линейности, и результаты неоднозначны. Поэтому предпочтение отдают качественным методам, основанным на получении результата "да или нет" - есть или нет рекомбинация.
Качественые методы позволяют обойтись меньшим количеством скрещиваний, что весьма существенно при большом количестве картируемых точковых мутаций, и определить не только взаимное положение генов, но и физическое расстояние между ними, причем нередко дают лучшее разрешение, чем количественные.
Так, например, в гене CYC1 с помощью двухсайтовых скрещиваний (количественный метод) было выделено 35 сайтов, а с помощью делеционого картирования их число удалось увеличить до 46. Наиболее эффективен и пользуется наибольшей популярностью в настоящее время метод перекрывающихся делеций.
Внутригенное картирование осуществляют методами двухсайтовых скрещиваний , трехсайтовых скрещиваний , а также методом фланговых маркеров и методом перекрывающихся делеций . Разновидностью метода перекрывающихся делеций является метод спасения маркера на плазмиде .
Для повышения частоты рекомбинации применяют различные индуцирующие агенты, предпочтительно с линейной зависимостью эффекта от дозы - рентгеновы лучи ( Manney, Mortimer, 1964 ), гамма- лучи ( Denis-Dufil, Kaplan, 1976 ), используют также облучение УФ- лучами ( Lawrence, Christensen, 1974 ).
