Raf-1 Киназа (p74)

Карта белка Raf-1 киназы

p74raf - цитоплазматическая Ser/Thr - специфическая киназа . Он не обладает четвертичной структурой. Полипептид содержит С-концевой каталитический домен; N-концевая область белка является регуляторной ( McCormick F., 1994 ).

р74raf удовлетворяет всем критериям эффектора ras . Он связывается с р21ras напрямую и активируется им; для этого необходим эффектор- связывающий домен ras. Мутационный анализ показал, что существует корреляция между трансформирующим потенциалом ras и его взаимодействием с р74raf. Район р74raf, необходимый для связывания - N-концевой домен ( Warne D.H. ea, 1993 , Zhang X-F. ea, 1993 ).

Показано, что инактивация raf блокирует трансформацию клеток ras, и наоборот, нефункциональный ras не дает возможности многим тирозинкиназным рецепторам активировать р74raf ( Roberts T.M., 1992 ). Связывание р21ras и р74raf строго зависит от GTP.( Warne D.H. ea, 1993 ).

Каков же механизм активации Ser/Thr киназы raf? При совместной экспрессии в клетках онкогенного мутанта Gly12Val ras и raf изменилась локализация последнего: он обнаруживался в подмембранном пространстве. Тогда,чтобы проверить гипотезу об активации raf, вызванной переносом на мембрану, был сконструирован белок р74raf, несущий на своем С-конце сигналы пренилирования , характерные для ras. Действительно, этот полипептид был постоянно локализован под плазматической мембраной, причем независимо от ras. Локализованный на мембране raf был активирован в той же степени, что и нормальный, экспрессированный вместе с Gly12Val ras ( Stokoe D. ea, 1994 ).

Таким образом, роль ras (подмембранного белка) в активации raf заключается в изменении локализации последнего. Оказавшись в подмембранном пространстве, raf, по-видимому, высвобождает ras и связывается с каким-то неизвестным фактором на мембране. Это устраняет негативное влияние регуляторного домена, и киназная активность возрастает.

р74raf активирует каскад Ser/Thr киназ MEK ( MAPKK - mitogen-activated protein kinase kinase) и ERK ( MAPK - mitogenactivated protein kinase ) ( рис. 13 ; стрелки указывают порядок активации; во всех случаях, кроме первого, она происходит путем фосфорилирования фермента по Ser/Thr остаткам) ( Zhang X-F. ea, 1993 ; McCormick F., 1994 )

Активация киназ приводит к фосфорилированию некоторых факторов транскрипции ( Blenis J., 1993 , цит по Sun H. ea, 1994 ) и далее к активации синтеза ДНК ( Sun H. ea, 1994 ). Впрочем, есть данные о том, что киназный каскад является гораздо более разветвленной и усложненной сетью ( Roberts T.M., 1992 ).

Следует отметить высокую степень гомологии киназ у различных организмов: дрожжей, амфибий и млекопитаюших ( Nishida E. and Gotoh Y., 1993 ).

Кроме того, необычна функция второго фермента каскада, МЕК - эта киназа имеет двойную специфичность и может фосфорилировать как Ser/Thr, так и Tyr остатки.

Ссылки:

Все ссылки